SECUENCIACIÓN DE ADN

LA ESTRUCTURA PRIMARIA DE LAS PROTEÍNAS PUEDE DETERMINARSE POR MÉTODOS QUÍMICOS y A PARTTR DE SECUENCIAS GÉNICAS.

La estructura primaria de las proteínas se caracteriza de dos maneras:

•             Por su composición global de aminoácidos.

•             Por la secuencia exacta de aminoácidos.

La composición de aminoácidos de una proteína proporciona la misma información que un análisis fundamental de una molécula: los tipos de aminoácidos presentes y su abundancia, pero no el orden lineal.

En contraste, la secuencia de una proteína es como su huella dactilar, establece la identidad singular de una proteína: el orden lineal de aminoácidos. La composición de una proteína se calcula con facilidad a partir de la secuencia.

La composición y la secuencia se determinan por métodos químicos, basados en la capacidad de escindir la columna vertebral peptídica en el enlace peptídico.

El método clásico para determinar secuencia de aminoácidos de una proteína implica una degradación llamada degradación de Edman. En este procedimiento se marca el grupo amino de la terminal N de un polipéptido y luego se escinde y se identifica mediante cromatografía líquida a alta presión. El polipéptido queda más corto, con un nuevo aminoácido en la terminal N. Se repite el ciclo sobre el polipéptido cada vez más corto, hasta que se hayan identificado todos los restos.

La secuencia de aminoácidos de una proteína se puede deducir a partir de la secuencia de su mRNA o gen. Dado que, por lo general, la secuencia de mRNA y el DNA es más rápida que la formación de las secuencias químicas de las proteínas, este enfoque es hoy la forma más usada para determinar las secuencias proteicas, en especial de las proteínas grandes.

Las técnicas de recombinación desarrolladas en las décadas de 1970 y 1980 permitieron la detección y la clonación de mRNA y la codificación de proteínas específicas.

SECUENCIACIÓN DE ADN.

Es una técnica que intenta elucidar el orden de las bases nitrogenadas de una sección específica del material genético. Implica la fragmentación de ADN por la acción de las enzimas de restricción Los trozos obtenidos son separados de acuerdo con su tamaño en un procedimiento llamado electroforesis.

El orden de las bases nitrogenadas de los trozos separados se conoce a través de máquinas automáticas de secuenciación.

En promedio, estos aparatos establecen las secuencias de 20000 a 50000 bases en unas horas.

Es importante conocer la secuencia de nucleótidos de un gen por que:

•             Permite determinar la secuencia de aminoácidos.

•             Hace posible deducir la función potencial de la proteína en la célula.

•             Son indispensables para diagnosticar enfermedades genéticas.

•             Permite establecer la secuencia del genoma humano en su totalidad.

          

PASOS PARA LA REALIZACIÓN DE UNA SECUENSIACION